Чистые культуры

Чистые культуры. В естественных условиях редко приходится встречать один какой-либо вид микробов в чистом виде: обыкновенно он находится в смеси со многими другими, поэтому необходимо располагать методами, позволяющими выделить требуемого микроба из смеси с другими и затем размножить его в любых количествах. Разводка одного какого-либо вида микробов на питательных средах называется его чистой культурой (ср. бактерии, IV, 491 и др.). Изучение чистой культуры имеет громадное значение, так как помимо тех внешних признаков (форма, взаимное расположение, подвижность, отношение к краскам и пр.), которые обнаруживаются при микроскопическом исследовании, оно позволяет изучить биохимические свойства микробов, определить особенности их роста на питательных средах, их действие на организм животных и их отношение к кровяной сыворотке («реакции иммунитета») людей и животных, у которых они вызвали заболевание или которые получили повторное впрыскивание определенных микробов.

Если смесь различных микробов засевается в жидкую питательную среду, например в молоко или бульон, то все микробы размножаются более или менее равномерно, и их невозможно отделить друг от друга. Если же смесь микробов наносится на плотную питательную среду, например на желатин или агар, то каждый микроб фиксируется отдельно и размножаясь дает обособленное скопление однородных микробов, так называемую колонию, различимую простым глазом. При достаточном разведении засеваемого материала (гноя, крови, воды и проч.), микробы фиксируются на значительном расстоянии один от другого и получаются изолированные колонии, которые можно с удобством захватить кончиком тонкой платиновой проволочки и перенести в жидкие или плотные питательные среды для дальнейшего размножения в чистом виде. Обычно колония при удачном, т. е. достаточно редком, посеве образуется из одной микробной клетки или, если однородные клетки прочно соединены между собой, как, например, диплококки, связанные попарно, или стрептококки, связанные в цепочки, то колония образуется вследствие размножения нескольких однородных микробов. Но может случиться, что, два разнородных микроба слипаются между собой и фиксируются на плотной питательной среде вместе. Тогда развившаяся колония будет заключать в себе два вида микробов. В таких случаях пересевами смешанных колоний на плотные среды удастся довольно легко обособить оба вида. Однако, бывают случаи, когда такое обособление весьма затруднительно и даже невозможно. В таких случаях приходится обращаться к получению чистой культуры не из одной колонии, а из одной микробной клетки. Этот последний метод дает абсолютную уверенность в получении чистой культуры. Но он, как более сложный, применяется на практике лишь в специальных случаях, как только что упомянутый, или для получения чистой культуры дрожжей. В последнее время для улавливания одной микробной клетки сконструированы специальные приборы «микроманипуляторы».

Метод получения чистой культуры. 1) Метод разведения, введенный Пастером и практиковавшийся до открытия Кохом плотных питательных сред, основан на том, что при достаточном разведении исходного материала можно достичь того, что в определенном объеме жидкости, например в одной капле или   в одном платиновом ушке, будет предположительно  заключаться только одна бактерийная клетка. Следовательно, при переносе этого объема в пробирку с питательной средой можно получить чистую культуру, происходящую из одной микробной клетки. Конечно, практически достигнуть такого равномерного распределения микробов, чтобы в каждой объемной единице жидкости заключалось их одинаковое количество, невозможно. Поэтому результаты, получаемые посредством метода разведения, ненадежны, сам же метод весьма кропотлив.

2) Метод пластинчатых разливок. В качестве питательной среды употребляются плотные среды, обыкновенно мясопептонная желатина или агар. Желатина расплавляется на водяной бане при 38-40°, а агар — при 100° и затем охлаждается до 43—45°. В первую пробирку вносится одно платиновое ушко исследуемого материала, и содержимое пробирки тщательно перемешивается. Из первой пробирки переносится во вторую три ушка, а из последней пять ушков в третью. Если материал очень богат микробами, то таким же образом приготовляется еще четвертое и пятое разведения. Таким образом, достигается достаточное разведение материала, почему, если вылить содержимое пробирок на чашечки Петри (круглые, мелкие, с плоским дном стеклянные сосуды, прикрывающиеся съемной стеклянной крышкой), то из отдельных микробов, фиксированных в застывшей среде, развиваются изолированные колонии, которые удобно захватить платиновой проволочкой для пересева. Изолированного положения колоний достигают также распределением исследуемого материала штрихами платиновой петлей или стеклянным шпателем по поверхности плотной среды (обыкновенно агара). Нередко для получения чистой культуры требуемого микроба, находящегося в исследуемом материале в скудном количестве и в смеси с большим количеством посторонних микробов, пользуются так наз. методами предварительного накопления или обогащения. Для этого исследуемый материал вносится в питательные среды, составленные таким образом, что искомый микроб находит в них условия, наиболее благоприятствующие его размножению, тогда как размножение других микробов задерживается. После предварительного накопления микробов делаются пересевы на плотные среды, как было описано выше.

С. Коршун.